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Bio-Rad伯乐变性梯度凝胶电泳（DGGE）

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产品详情

【介绍】

运用DGGE搜寻未知突变

DGGE 是基于以下原理，即增加聚丙烯酰胺凝胶内变性剂的浓度会熔解双链DNA 的不同区域。当温度达到低熔解度区域的熔解温度(Tm) 时，DNA 部分熔解，在凝胶中形成迁移率下降的分支分子（Myers et al.1987）。在均一的运行温度（50—65°C）和尿素与甲酰胺线性变性梯度条件下即形成了变性环境。梯度以垂直或平行于电泳方向形成。DGGE 是灵敏的突变检测方法，其效率可达99%（Grompe 1993）。DCode 系统通过以下途径优化DGGE：

温度控制模块提供45–70°C 内的一致运行温度
系统可运行2 块16 x 16 cm 凝胶或4 块7.5 x 10 cm 凝胶
可选择的MacMelt 或WinMelt 软件优化了GC 夹及引物的置放

DGGE 的两种模式。A ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向垂直。从原生乳腺癌种扩增的p53 基因6 号外显子的野生型和突变型等位基因通过垂直DGGE（80V，56°C，2 小时）分离。感谢AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的数据。B ，凝胶的变性梯度方向与电泳方向平行。p53 基因8 号外显子的野生型和突变型等位基因在8%丙烯酰胺：甲叉(37.5：1) 平行梯度（40–65% 变性剂）凝胶上，1 x TAE 缓冲液， 60°C，150 V，电泳2.5 个小时。左泳道，突变型等位基因；中，野生型等位基因；右，突变型与野生型等位基因。